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DNA Marker電泳常見問題分析
合肥博美生物科技有限責任公司 / 2015-03-02

 DNA Marker電泳常見問題分析

 
Q:為什么marker條帶非常模糊,無法辨別具體條帶? 
A:出現(xiàn)上述情況,可能有以下幾個原因:1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請確保在使用過程中避免核酸酶污染;2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后,離子濃度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果,建議經(jīng)常更換電泳緩沖液;3. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm,溫度應(yīng)低于30;4. marker上樣量過多。請根據(jù)說明書選用合適上樣量;5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖;此外,凝膠凝固不均勻也會導致條帶模糊。 

Q:為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶(如啞鈴狀等)? 
A:出現(xiàn)上述情況,多與以下幾個原因有關(guān):1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果,建議經(jīng)常更換電泳緩沖液;2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm,電壓太高可能也會導致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外,凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會導致該現(xiàn)象出現(xiàn)。 

Q:為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶? 
A:出現(xiàn)上述情況可能是:1. marker上樣量較低,可適當增加上樣量;2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會導致電泳條帶弱或根本沒有條帶;3. 電泳時間過長導致marker條帶跑出凝膠,可縮短電泳時間,降低電壓,增加凝膠濃度。 

Q:為什么marker缺帶? 
A:對于含有較小片段的marker,如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象,可能是因為:1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認所致,可適當縮短電泳時間,降低電壓,同時增加凝膠濃度;2. 凝膠中EB含量過低,導致大片段結(jié)合EB量太少或沒有,在紫外光下亮度太低,可適當增加EB用量。