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DNA Marker電泳常見問題分析
合肥博美生物科技有限責任公司 / 2015-03-02
DNA Marker電泳常見問題分析
Q：為什么marker條帶非常模糊，無法辨別具體條帶？
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個原因：1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請確保在使用過程中避免核酸酶污染；2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；3. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm，溫度應(yīng)低于30℃；4. marker上樣量過多。請根據(jù)說明書選用合適上樣量；5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會導致條帶模糊。
Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個原因有關(guān)：1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應(yīng)不超過20V/cm，電壓太高可能也會導致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會導致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶？
A：出現(xiàn)上述情況可能是：1. marker上樣量較低，可適當增加上樣量；2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會導致電泳條帶弱或根本沒有條帶；3. 電泳時間過長導致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時間，降低電壓，增加凝膠濃度。
Q：為什么marker缺帶？
A：對于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因為：1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認所致，可適當縮短電泳時間，降低電壓，同時增加凝膠濃度；2. 凝膠中EB含量過低，導致大片段結(jié)合EB量太少或沒有，在紫外光下亮度太低，可適當增加EB用量。
